Préparation de mitochondries de cellules cardiaques
TP proposé par G.Grousset, réalisé au lycée La Martinière Duchère,
à partir d’un TP proposé aux journées nationales ExAO et nouvelles technologies de Marseille
Matériel nécessaire

















Préparation des solutions
- milieu d’extraction
solution de phosphate monopotassique à 9,08 g de KH2PO4 par litre,
solution de phosphate disodique à 9,47 g de Na2HPO4 par litre,
mélanger 322 mL de la solution de phosphate disodique et 78 mL de la solution de phosphate monopotassique pour obtenir 400 mL de solution tampon à pH= 7,2,
ajouter aux 400 mL, 800 mg de Sérum Albumine bovine (S.A.B.),
ajouter enfin 45 g de mannitol et éventuellement 0,02 g de KCl et 0,02 g de MgCl2.
- solution de succinate de sodium (acide organique du cycle respiratoire)
faire 10 mL à une concentration de 400 mmoles (acide succinique C4H6O4, PM=118 g),
amener ensuite, au pHmètre, avec de la soude à 30%, l’acide succinique à pH=7,2. NB : une utilisation directe d’acide succinique ne permettra pas de réaliser la manipulation,
si l’on dispose de succinate de sodium, faire simplement une solution de succinate à 20 g/L (contrôler le pH et l’amener éventuellement à 7,2).
- solution d’acide cyanhydrique (inhibiteur de respiration)
découper 2 ou 3 feuilles de Laurier Cerise dans un mortier et broyer en ajoutant 20 mL environ de solution tampon.
la solution doit avoir une légère odeur d’amande amère.
Protocole d’extraction : suivre les schémas ci-dessous




oxygéner le surnageant obtenu (ou le filtrat) dans un bécher sur glace à l’aide d’un agitateur magnétique pendant 5 min au moins avant l’utilisation afin de saturer en O2 les transporteurs et favoriser l’épuisement en substrats divers.
Eléments pour l’élaboration d’un protocole de mesure
- le glucose est un métabolite respiratoire cellulaire,
- l’acide succinique est un métabolite respiratoire,
- l’acide cyanhydrique est un poison de la respiration, c’est-à-dire qu’il bloque l’activité respiratoire.




Pistes d’utilisation



Voir des exemples d’enregistrements ExAO :
-> Action glucose, succinate ;
-> Blocage par l’antimycine, par des extraits de laurier-cerise.