Courrier à l’auteur
TP proposé par lycée La Martinière Duchère, Lyon (69)
TP proposé par lycée La Martinière Duchère, Lyon (69)
- Matériel nécessaire
– papier à chromatographie : gel de silice sur aluminium (format 7 x 9 cm), il ne faut pas toucher la face blanche sur laquelle se feront les dépôts
– bécher de 250 mL,
– solvant à chromatographie des glucides,
– film plastique transparent,
– sèche-cheveux,
– révélateur à préparer au dernier moment,
– cuvette à révélation,
– une grosse pince,
– 5 micropipettes,
– sève élaborée extraite d’un végétal (courgette),
– solutions pures de glucose, de saccharose, de lactose, maltose à 20g/l.
- Préparation des produits
– préparation du solvant :- 60 % de méthyl-éthyl-cétone,
- 20% d’acide acétique glacial,
- 20 % de méthanol.
– préparation du révélateur (mélanger les deux produits au dernier moment) :- 1 volume de permanganate de potassium à 2 %,
- 1 volume de carbonate anhydre de sodium à 4%.
- Extraction de la sève
– presser doucement le pédoncule de la courgette très fraîche et simultanément, aspirer à l’aide d’une micropipette le liquide qui en sort : la sève élaborée. Extraire le liquide au dernier moment
- Montage de la chromatographie
– sur la plaque de gel de silice, tracer un trait au crayon à 1 cm du bord inférieur et placer 5 repères équidistants,
– verser un peu moins d’un cm de solvant au fond du bécher et fermer la cuve à l’aide du film transparent.
- Réalisation des dépôts et mise en route de la chromatographie
– sur les repères tracés précédemment, déposer à la micropipette 3 fois une goutte de chaque solution de sucre et de sève extraite afin que chaque dépôt soit suffisamment concentré,
– entre chaque dépôt, sècher au sèche-cheveux ou laisser sècher,
– mettre la plaque dans la cuve : les dépôts doivent être au dessus du solvant,
– fermer la cuve à l’aide du film et laisser migrer le solvant pendant 3/4 d’heure, 1 heure,
- Révélation
– sortir la plaque, la sécher au sèche-cheveux jusqu’à disparition complète de l’odeur d’acide acétique,
– plonger la plaque dans le révélateur (qui vient d’être mélangé) en recouvrant le gel de silice, pendant 10 secondes environ,
– sécher à nouveau.
- Compréhension du résultat
– les taches jaunes qui apparaissent correspondent à la réduction du permanganate par les fonctions alcool des sucres.
– chaque sucre ayant migré plus ou moins haut sur le gel, il est identifiable par sa position dans le sens vertical.
- Liens
– Fiche technique de la chromatographie de l’acide lactique
– Fiche technique de la chromatographie des acides du vin
– Fiche technique de la chromatographie des acides aminés