Préparation de grains de pollen
Protocole de purification de grains de pollens et de préparation d’une suspension pour observation microscopique.
Auteure : Lydia DANJON, Lycée Descartes, Saint-Genis-Laval
- Récolter et sécher sur une feuille de papier filtre les inflorescences à maturité durant 4 jours dans un endroit sec.
Inflorescences mâles de bouleau, appelées aussi chatons, en cours de séchage - Extraire grossièrement le pollen sec en frottant les fleurs
Attention au risque d’allergie => port d’un masque conseillé - Passer au tamis 500 µm le pollen pour retenir les grosses particules.
- Préparer une solution de KOH à 10%, environ 200 mL (possibilité d’acheter de la « lessive de soude » du commerce et de la diluer au 1/3)
- Dans un bécher en Pyrex de 250 mL, verser la solution de KOH, les pollens et porter à ébullition durant 10 minutes soit à l’aide d’un bain-marie à 80°C soit avec une plaque électrique position moyen.
Attention aux vapeurs et aux risques d’éclaboussures corrosives => hotte, port de lunettes de sécurité, gants, blouse - Laisser refroidir et décanter la suspension de pollens.
- Jeter le liquide surnageant dans le bidon de recyclage pour BASES et conserver le culot.
- Remettre le culot en suspension dans de l’eau distillée pour rinçage
- Passer au tamis 125 µm le pollen, et récupérer la suspension définitive de pollens
- Centrifuger 5 minutes pour éliminer l’eau de rinçage (peut être réalisé 2 fois…) ou laisser de nouveau décanter durant 24 heures.
À ce stade, le pollen peut être séché et conservé tel quel. - Faire une suspension de fushine très diluée (pointe d’une petite spatule) avec 1/3 de glycérol + 2/3 d’eau déminéralisée.
- Prélever le culot de pollens et introduire dans la solution glycérinée.
- Agiter la suspension de pollens obtenue durant 24 heures
- Flaconner la suspension datée et la stocker à l’obscurité dans un endroit sec.
Cette suspension peut être conservée durant 3 années.
