Préparation de grains de pollen

Publié le 26 juin 2023

Protocole de purification de grains de pollens et de préparation d’une suspension pour observation microscopique.

Auteure : Lydia DANJON, Lycée Descartes, Saint-Genis-Laval

  1. Récolter et sécher sur une feuille de papier filtre les inflorescences à maturité durant 4 jours dans un endroit sec.
    Inflorescences mâles de bouleau, appelées aussi chatons, en cours de séchage
  2. Extraire grossièrement le pollen sec en frottant les fleurs
    Attention au risque d’allergie => port d’un masque conseillé
  3. Passer au tamis 500 µm le pollen pour retenir les grosses particules.
  4. Préparer une solution de KOH à 10%, environ 200 mL (possibilité d’acheter de la « lessive de soude » du commerce et de la diluer au 1/3)
  5. Dans un bécher en Pyrex de 250 mL, verser la solution de KOH, les pollens et porter à ébullition durant 10 minutes soit à l’aide d’un bain-marie à 80°C soit avec une plaque électrique position moyen.
    Attention aux vapeurs et aux risques d’éclaboussures corrosives => hotte, port de lunettes de sécurité, gants, blouse
  6. Laisser refroidir et décanter la suspension de pollens.
  7. Jeter le liquide surnageant dans le bidon de recyclage pour BASES et conserver le culot.
  8. Remettre le culot en suspension dans de l’eau distillée pour rinçage
  9. Passer au tamis 125 µm le pollen, et récupérer la suspension définitive de pollens
  10. Centrifuger 5 minutes pour éliminer l’eau de rinçage (peut être réalisé 2 fois…) ou laisser de nouveau décanter durant 24 heures.
    À ce stade, le pollen peut être séché et conservé tel quel.
  11. Faire une suspension de fushine très diluée (pointe d’une petite spatule) avec 1/3 de glycérol + 2/3 d’eau déminéralisée.
  12. Prélever le culot de pollens et introduire dans la solution glycérinée.
  13. Agiter la suspension de pollens obtenue durant 24 heures
  14. Flaconner la suspension datée et la stocker à l’obscurité dans un endroit sec.
    Cette suspension peut être conservée durant 3 années.

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