Recherche expérimentale et manipulation mise au point par Mme Suzanne Garaix, professeur agrégée au Lycée International Lyon Cedex 07.

Matériel

• une boîte de levures Saccharomyces cerevisiae ade 1 ou ade 2 sur milieu solide pour ensemencement (ENS Lyon),
• un tube à UV à filtre 4w, 254 nm, et une enceinte isolante, adaptée à la dimension de la lampe UV sur socle (fabrication à prévoir). L’intérieur devra être peint en noir
• 2 paires de lunettes anti UV 100%
• 2 écrans faciaux
• 2 visières
• produits pour milieu complet à stériliser :
  • solide (20 g d’extrait de malt, 2 g d’extrait de levures, 20 g de glucose, 1 litre d’eau distillée, 15 g d’agar)
  • liquide (20 g d’extrait de malt, 2 g d’extrait de levures, 20 g de glucose, 1 litre d’eau distillée)
• tubes stériles
• 20 boîtes de Pétri, eau distillée stérile
• ensemenceur
• agitateur électrique vortex, une étuve, un chronomètre
• un feutre marqueur ou des étiquettes collantes pour marquer les boîtes
• Fascicule : "Travaux pratiques de biologie des levures " Didier POL, collection Ellipses

Précautions

• Travailler dans des conditions d’asepsie, près d’un bec Bunsen allumé avant et durant la manipulation.
• Le protocole suivant doit être commencé 4 à 6 jours avant l’observation des résultats.
• Les mutations éventuelles sont provoquées sur les levures isolées, avant le développement des colonies.

Technique opératoire

• prélever avec la pointe d’un cure-dent stérile, sur milieu solide, des levures ade1 ou ade2. Le prélèvement doit avoir la grosseur d’une tête d’épingle.
• déposer ce prélèvement dans un tube contenant 3 ml de milieu liquide complet.
• agiter avec le vortex
• faire pousser une nuit à 30°C
• le lendemain matin, agiter le tube puis diluer entre 1/3000 et 1/5000 dans de l’eau distillée stérile
• prélever 200 µl de ce milieu dilué, étaler sur une boîte de Pétri contenant le milieu complet solide stérile
• préparer ainsi une vingtaine de boîtes de Pétri identiques
• conserver deux boîtes qui ne seront pas exposées aux UV, comme témoins
• exposer à la lampe à UV toutes les autres boîtes aussitôt après préparation :
  • allumer le tube à UV 1 heure avant son utilisation et le laisser allumé pendant toute la durée de la manipulation afin que l’énergie débitée soit constante. Placer sur le tube une enceinte isolante qui ne sera soulevée qu’au moment du passage de la boîte
  • se munir de gants, de lunettes anti-UV, d’un écran facial avec visière
  • prévoir une durée d’exposition différente pour chaque boîte, par exemple : 2 s, 4s, 6s, 10s, 20s, 30s, 40s, 60s, 2 min, 3 min, ... Ne pas oublier de marquer la durée d’exposition sur chaque boîte
  • soulever l’enceinte isolante au moment de passer la boîte sous le tube
  • placer la boîte, sans couvercle, sur le socle, sous le faisceau d’UV le temps désiré. Pour exposer chaque culture de la même façon, faire un repère sur le socle.
  • replacer l’enceinte isolante immédiatement après.
• mettre toutes les boîtes, exposées ou non aux UV, à l’étuve à 30°C
• les résultats sont obtenus au bout de 3 à 5 jours.

Résultats obtenus et pistes d’utilisation

Programme de seconde, biologie, partie II : les mutations introduisent une variabilité de l’information génétique. Certains agents de l’environnement peuvent augmenter le taux de mutations.

Boîte S.cerevisiae ade2, exposée 10s		Boîte S.cerevisiae ade2, exposée 10s (détail)
Boîte S.cerevisiae ade2, exposée 30s		Boîte S.cerevisiae ade2, exposée 30s (détail)
Boîte S.cerevisiae exposée 90s		Boîte S.cerevisiae exposée 90s (détail)
Boîte S.cerevisiae exposée 150s		Boîte S.cerevisiae exposée 150s (détail)