Réactifs et solutions usuels pour le laboratoire

Publié le 19 mars 2008

A

Extrait d’ acide cyanhydrique Utilisation
Découper des feuilles de Laurier-Cerise (Prunus Lauro-Cerasus) en morceaux dans un mortier
Broyer les feuilles dans un peu d’eau physiologique ou de tampon de respiration pour mitochondries
Filtrer l’extrait qui contient de l’acide cyanhydrique libéré par hydrolyse et le broyage
Blocage de la respiration mitochondriale
Ex.A.O.
Agar-agar Utilisation
solution à 1,4 % dans l’eau physiologique remplissage des boîtes pour immunodiffusion
Albumine du blanc d’œuf Utilisation
Diluer 1 blanc d’œuf dans 200 mL d’eau distillée.
Chauffer doucement en agitant constamment ; vers 70°C, la solution prend un aspect laiteux par coagulation de l’ovalbumine.
Arrêter aussitôt le chauffage et filtrer une fois.
TP analyse de matière organique
Électrophorèse de protéines

C

solvant Chromatographie des glucides Utilisation
60 % de méthyl-éthyl-cétone,
20 % d’acide acétique glacial,
20 % de méthanol.
permet de réaliser la chromatographie des sucres sur gel de silice
révélateur Chromatographie des glucides Utilisation
1 volume de permanganate de potassium à 2 %,
1 volume de carbonate anhydre de sodium à 4%.
permet de révéler la chromatographie des sucres
mélanger les deux produits au dernier moment en ne préparant que les quantités nécessaires
solvant Chromatographie de l’acide lactique Utilisation
butanol 1 : 1 volume additionné de bleu de bromophénol (jaune à pH<4,5), 1 g/litre de butanol
acide acétique glacial : 0,5 volume
eau distillée : 0,5 volume
solvant de chromatographie de l’acide lactique et autres acides organiques

E

Eau physiologique Utilisation
9 g de NaCl pour 1000 mL d’eau distillée multiples
Électrolyte pour sonde oxymétrique Schott Utilisation
Na3PO4 à 50 g/L
donc 1,5 g pour un flacon de 30 mL
remplissage capsule de la sonde Schott utilisée par Jeulin et d’autres constructeurs

G

Globules rouges de mouton (=GRM) Utilisation
Les hématies livrées (Biomérieux) sont à 50%.
Réaliser une dilution à 2% soit 1 mL d’hématies pour 24 mL de tampon Véronal ou tampon PBS
TP immunologie

K

Liquide de KNOP Utilisation
Eau distillée 1000 g
Nitrate de Ca 1 g
Nitrate de K 0,25 g
Phosphate de K 0,25 g
Sulfate de Mg (ou sulfate de Ca) 0,25 g
Phosphate de fer 0,1 g
cultures hors-sol
cultures algues unicellulaires
cultures in-vitro

M

Milieu d’extraction des mitochondries Utilisation
solution de phosphate monopotassique à 9,08 g de KH2PO4 par litre,
solution de phosphate disodique à 9,47 g de Na2HPO4 par litre,
mélanger 322 mL de la solution de phosphate disodique et 78 mL de la solution de phosphate monopotassique pour obtenir 400 mL de solution tampon à pH= 7,2,
ajouter aux 400 mL, 800 mg de Sérum Albumine bovine (S.A.B.),
ajouter enfin 45 g de mannitol et éventuellement 0,02 g de KCl et 0,02 g de MgCl2.
milieu d’extraction des mitochondries de cœur de bœuf (par exemple)

N

Solution pour conservation nerf de crabe Utilisation
30 g de NaCl + 0,9 g de KCl + 1,9 g de CaCl2 + 4,19 g de NaHCO3
pour 1000 mL d’eau distillée
NB : ce milieu peut être oxygéné.
milieu de conservation du nerf de crabe

P

PBS Utilisation
7,65 g de NaCl, 0,724 g de Na2PO4 et 0,210 g de NaPO4
pour 1000 mL d’eau distillée
lavages ou dilution de cellules

R

Réactif de Hill Utilisation
3,29 g de ferricyanure de potassium (K3[Fe(CN)6] dans 100 mL d’eau distillée réaction de Hill à partir de chloroplastes isolés
Ringer Utilisation
6,5 g de NaCl + 0,25 g de KCl + 0,12 g de CaCl2 + 0,20 g de NaHCO3 multiples
Rouge PONCEAU Utilisation
Diluer le rouge Ponceau à raison de 13 mL pour 90 mL d’eau distillée Coloration des bandes cellogel à électrophorèse.
Coloration des dépôts d’immunodiffusion

S

Sérum pathologique (exemple) Utilisation
Sérum humain reconstitué comme le LYOTROL N de Biomérieux
Gammaglobulines antitétaniques sur ordonnance
Ajouter à 1 mL de sérum Lyotrol N, 0,1 à 0,3 mL de gammaglobulines antitétaniques selon l’intensité de la tache d’Ig désirée
Électrophorèse des protéines sériques
Solution zéro pour sonde oxymétrique Utilisation
sulfite de sodium (Na2SO3) ou hyposulfite de sodium (Na2S2SO3) en solution saturée
attention de conserver le flacon bien fermé et plein pour éviter l’oxydation
NB : ajouter au fond du flacon des billes de verre au fur et à mesure qu’il se vide
solution dite "zéro" permettant de régler le zéro des sondes à oxygène
attention, ce produit est corrosif notamment l’hyposulfite
Solution de succinate de sodium Utilisation
faire 10 mL à une concentration de 400 mmoles (acide succinique C4H6O4, PM=118 g),
amener ensuite, au pHmètre, avec de la soude à 30%, l’acide succinique à pH=7,2.
si l’on dispose de succinate de sodium, faire simplement une solution de succinate à 20 g/L (contrôler le pH et l’amener éventuellement à 7,2).
substrat fonctionnel des mitochondries de cœur par exemple
Suspension de levures Utilisation
oxygénée, pour respiration en Ex.A.O. :
suspension à 5 g/l, à oxygéner au minimum 2 h avant le TP dans une éprouvette au fond de laquelle plonge un diffuseur d’aquarium aérant la suspension

non oxygénée pour fermentation :
suspension à 15 g/l
respiration cellulaire, Ex.A.O.
fermentation, Ex.A.O.

T

Tampon PBS (pH=7,2) Utilisation
7,65 g de NaCl + 0,724 g de Na2PO4 + 0,210 g de NaPO4
pour 1000 mL d’eau distillée
dilution de l’agar-agar pour les boîtes test d’immunodiffusion
Tampon P-saccharose Utilisation
171 g de saccharose + 36,5 g de Na2HPO4 + 16,6 g de KH2PO4
pour 1000 mL d’eau distillée
milieu d’extraction de chloroplastes ou de mitochondries végétales
Tampon TRIS-VERONAL Utilisation
Diluer le TRIS VERONAL à raison de 10ml pour 90 mL d’eau.
La solution se conserve un mois environ au réfrigérateur et se réutilise.
Trempage des bandes cellogel à électrophorèse.
Remplissage de la cuve à électrophorèse.

V

Vert de méthyl acétique Utilisation
1 g de vert de méthyl en poudre
55 mL d’eau distillée
45 mL d’acide acétique
coloration des noyaux, des chromosomes et de l’ADN extrait des cellules

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