Matériel nécessaire :

• une solution d’anticorps de sérum de lapin ayant reçu préalablement des injections de globules rouges de mouton (SG), sérum dit "hémolytique" ;
• une suspension de globules rouges de mouton à 2% ;
• une solution de complément (C) maintenue dans la glace ;
• une solution tampon (tampon PBS ou Véronal) constituée d’un diluant ;
• 3 tubes à hémolyse vides, un feutre marqueur indélébile ;
• 3 pipettes Pasteur pour prélévement et 4 pipettes de 0,5 mL avec poire ;
• un microscope, lames, lamelles ;
• une étuve réglée à 37° C ;
• éventuellement, 3 tubes résultats réalisés avant la séance et distribués en cours de TP (en effet, le résultat n’est obtenu qu’après 30 min d’étuve).

Préparation des produits :

• préparation du tampon PBS : 7,65 g de NaCl, 0,724 g de Na₂PO₄ et 0,210 g de NaPO₄ pour 1000 mL d’eau distillée ;
• préparation du complément : diluer le complément de cobaye au 1/10mL dans tampon PBS et maintenir dans la glace ;
• préparation du sérum hémolytique : diluer le sérum au 1/10mL dans tampon PBS ;
• préparation des hématies de mouton (GRM) : diluer les hématies : 0,5 mL d’hématies pour 2 mL de tampon PBS.

Conseils permettant la réalisation du protocole expérimental du test d’action du complément :

• les produits s’utilisent par fractions de 0,2 mL ;
• on fait en sorte que chaque tube contienne 0,6 mL au total afin qu’ils puissent être comparés, si 2 substances sont utilisées, il faut alors compléter par 0,2 mL de solution tampon ;
• il s’agit de rechercher les conditions de l’hémolyse des hématies de mouton ;
• les tubes préparés, sont placés à l’étuve pendant 30 min avant observation ;
• on peut observer au microscope le contenu du tube ou le culot obtenu.

Liens :

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